刘双又、喻新建主任：CD58 可作为复发难治性 B-ALL 患者多线治疗后的白血病标记 | ASH2022 中国之声

当前，随着治疗手段不断丰富，特别是嵌合抗原受体 T（CAR-T）细胞治疗、抗体等进入临床，对于经多线治疗的复发难治白血病患者，如何更好地进行复查随访，如何选择合适的微小残留病（MRD）监测标志物，以及多线治疗是否会对白血病细胞标志物表达产生影响等是领域内专家学者关注的热点问题。

在本届美国血液学会（ASH）年会上，高博医学（血液病）北京研究中心北京高博博仁医院刘双又主任和高博诊断中心喻新建主任合作开展的一项研究入选年会口头报告环节，该研究证明 CD58 可作为复发或难治性急性 B 淋巴细胞白血病（R/R B-ALL）患者多线治疗后的白血病细胞标志物，用来监测疗效并指导治疗策略制定。

以下为大家简单介绍研究的主要结果，并邀请刘双又主任和喻新建主任带来研究解读。

研究概况

1 研究方法

北京高博博仁医院流式细胞检测中心已经将 R/R B-ALL 患者白血病细胞上的 CD58 抗原作为常规检测的标记。本研究收集了 2019 年 5 月至 2022 年 5 月 31 日来我院做 CAR-T 治疗的 R/R B-ALL 患者的数据。

流式检测采用 BD FACSCanto II 8 色流式细胞仪，结果采用 BD 的 FACS Diva 软件或 Beckman Coulter 的 Kaluza 软件进行分析。CD58 抗原完全表达、部分表达和不表达分别被定义为 CD58 阳性细胞比例>80%、20%-80% 和<20%，完全表达和部分表达均为阳性，不表达为阴性。

2 研究结果

• 患者基线特征

共有 274 例计划接受 CD19 CAR-T 细胞治疗的 R/R B-ALL 患者，此前均接受过多线化疗，61 例患者接受了异基因造血干细胞移植（allo-HSCT），6 例有抗体（CD20、CD19 或 CD22）治疗史。患者中位年龄为 12 岁，包括 97 例成人和 177 例小于 18 岁的儿童。

在接受 CAR-T 细胞治疗前所有患者均进行了 CD58 抗原检测。

• CAR-T 细胞治疗前患者 CD58 表达情况

在 274 例患者中，228 例患者显示 CD58 表达，包括 180 例完全表达和 48 例部分表达；46 例患者为 CD58 阴性，表明 CD58 在大多数（83.2%，228/274）接受过多种强化疗药物甚至造血干细胞移植治疗后的 R/R B-ALL 患者中均有表达。

• CD19 CAR-T 细胞治疗失败或复发后患者 CD58 表达情况

研究随访了 57 例在接受 CD19 CAR-T 细胞治疗前有 CD58 表达，但 CAR-T 细胞治疗失败或复发的患者。在 57 例患者中，10 例为 CD58 阴性，47 例仍显示为 CD58 阳性，CD58 的表达率为 82.5% (47/57)。

• CD58 缺失对 CD19 CAR-T 细胞治疗疗效的影响

研究还对白血病细胞 CD58 阳性或阴性表达对 CAR-T 细胞治疗效果的影响进行了亚组分析。在 274 例接受 CD19 CAR-T 的 R/R B-ALL 患者中，有 6 例在细胞输注后 15 天内死亡或出院而无法评估治疗反应的患者，其余 268 例患者均有评估数据，其中包括 223 例 CD58 表达（完全或部分表达）和 45 例无 CD58 表达。

在 CD19 CAR-T 治疗后，有 CD58 表达的患者 CR（包括 MRD+CR）率为 91.9%，而无 CD58 表达的患者为 95.6%，表明 CD58 阴性与 r/r B-ALL 的 CAR-T 治疗失败无关。

3 研究结论

CD58 不仅在大多数（83.2%）未接受 CAR-T 细胞治疗的 r/r B-ALL 细胞中表达，并且也在大多数（82.5%）CAR-T 细胞治疗后的患者中表达。因此，CD58 可以作为一种白血病标志物，用于识别接受多线治疗（包括造血干细胞移植和 CAR-T）的 R/R B-ALL 患者的肿瘤细胞。此外，CD58 阴性患者在接受 CD19 CAR-T 治疗后取得了与 CD58 阳性患者相似的高 CR 率。

专家解读

刘双又主任：建议 CD58 作为 B-ALL 患者 MRD 常规检测指标

北京高博博仁医院收治的患者多是一些复发难治的患者，其中又以 B-ALL 为主。B-ALL 治疗后的流式 MRD 监测，可以发现早期复发患者，指导临床及时治疗，有助于改善患者预后。

既往多项研究表明，CD19 CAR-T 细胞治疗虽然在 B-ALL 中具有较高的完全缓解率，但仍有部分患者在治疗后复发，并且经常出现 CD19 阴性复发。如此一来，就少了一个很重要的 B 系标志物。在这种情况下，我们亟需寻找其他在 B-ALL 细胞上广泛而且稳定表达的抗原，来帮助有效识别白血病细胞。

已有研究表明，作为免疫球蛋白超家族一员的 CD58，在 B-ALL 的白血病细胞中高表达，可做为 MRD 监测的标志物。目前不多的对于 CD58 的研究，都是观察的初诊患者和短期化疗后的患者。关于 CD58 在接受了多线治疗，特别是接受 CAR-T 细胞治疗的 R/R B-ALL 患者中的表达未见报导。

基于此，我们对 R/R B-ALL 患者多线治疗后的 CD58 表达情况进行了探索。

我们把研究内容分为了三部分，第一部分和第二部分别对 CAR-T 细胞治疗前、CAR-T 细胞治疗失败或复发后的患者 CD58 表达情况进行了分析，第三部分则是对 CD58 表达状况是否会影响 CAR-T 细胞治疗疗效做了亚组分析。之所以设定亚组分析，是因为近两年有研究发现在淋巴瘤患者中，如果 CD58 不表达，其 CAR-T 疗效会比较差，所以我们也想要探究 CD58 表达与否是否会对 R/R B-ALL 患者 CAR-T 细胞治疗效果产生影响。

最终，我们发现，在接受过多种强化疗及异体造血干细胞移植后的 R/R B-ALL 患者中， 超过 80% 的患者 CD58 可以稳定表达，CAR-T 细胞治疗也仅导致小部分患者 CD58 抗原阴性，基于此，我们认为，可以将 CD58 作为 B-ALL 的标志物，建议无论是初治还是复发难治的 B-ALL 患者，均可常规检测该指标，以监测疗效并指导治疗策略制定，改善患者预后。

此外，研究结果显示，CD58 阴性表达的 R/R B-ALL 患者进行 CAR-T 治疗仍能获得较高的完全缓解率，R/R B-ALL 患者 CAR-T 治疗效果与 CD58 是否表达无关，这和在淋巴瘤患者中观察到的现象不一致，表明疾病类型不同，CAR-T 治疗的耐药机理也不同。

喻新建主任：CD58 可「担当大任」，标志物检测应注意以下几点

血液肿瘤细胞的残留（MRD）检测关键在于检测的灵敏度，灵敏度越高，MRD 检测水平就越深。目前，普遍应用流式细胞术和分子生物学技术检测 MRD，作为 R/R B-ALL 患者的独立预后指标。流式细胞术检测 MRD 的挑战之一，是找到灵敏度高且特异性强的，能够有效地鉴别正常 B 系前体细胞和白血病细胞的免疫标记，所以我们在文献复习和实验室既往观察的基础上探索并证明了 CD58 可「担当大任」。

CD58 不是一个新的标志物，一般开展血液肿瘤流式检测的单位都可以进行检测。在 CD58 检测过程中应注意以下 3 点：

（1）虽然 CD58 表达率相对较高，但因为仍有患者不表达或表达水平较低，所以建议组合其他常见的异常标记进行检测；

（2）经多线治疗后的 B-ALL 患者通常白细胞计数较低，残留的肿瘤细胞数量可能比较少，所以一定要确保检测细胞数足够多。如果送检标本的细胞计数很低，就需要采用一些技术进行细胞富集处理，以达到检测细胞数量的要求；

（3）当检测到的肿瘤细胞比例非常低，数量也很少的时候，出具检测结果报告时应格外慎重，最好能同时见到其它标记异常，并且结合其他实验室检测结果，再给出结论，以避免误判。

此外，既往一些临床流式室曾采用「刻舟求剑」的方式进行 MRD 的检测，即只检测患者初诊时做免疫分型发现的异常标记。但是血液肿瘤异质性较强，治疗方式多样，肿瘤细胞上的抗原表达也会出现变化，采用这种方式检测难免会有所遗漏。因此，在实际工作中，我们要避免这种做法。

值得指出的是，随着分子技术的发展，特别是高通量测序的应用，新发现了不少新的肿瘤标志物。这些新的肿瘤标志物有可能被用于流式检测。预期未来分子技术会更多助力流式进行新的肿瘤标记检测，提升肿瘤患者的流式监测效果。