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河北燕达陆道培医院王卉主任:流式细胞术检测脑脊液肿瘤细胞的专家共识解读

2021 年 8 月出版的《中华检验医学杂志》上,重磅推出了中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家编写的《流式细胞术检测脑脊液肿瘤细胞的专家共识》。这篇共识由河北燕达陆道培医院王卉主任和中国中医

2021 年 8 月出版的《中华检验医学杂志》上,重磅推出了中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家编写的《流式细胞术检测脑脊液肿瘤细胞的专家共识》。

这篇共识由河北燕达陆道培医院王卉主任和中国中医科学院广安门医院刘贵建主任执笔并担任通讯作者,来自全国 30 多家三甲医院的 40 多位专家经过研究讨论共同完成。

为了让大家更好了解这篇共识,王卉主任做了解读。

中枢神经系统是多种造血及淋巴系统肿瘤和非造血系统肿瘤容易累及的部位,急性白血病中枢累及发生率 30% 左右,淋巴瘤累及率 5%~25%。脑脊液检测是评价肿瘤中枢神经系统受累的重要依据。长期以来认为细胞学检查是金标准,然而细胞学检查的敏感性较低,特别是在低细胞含量的样本中敏感度更低,这些情况可能延误患者的正确诊断和治疗。

流式细胞术是上个世纪 70 年代问世的重要免疫学技术,尤其是近 30 年来在血液和免疫学领域取得快速进展,成为不可或缺的诊断工具。脑脊液检测方法中,流式细胞术几乎是目前所有技术中最快速、灵敏、实用的技术,可以极大程度提高脑脊液肿瘤细胞的检出率。

鉴于脑脊液这种微量细胞标本的检测不同于骨髓、外周血等常规标本,为了规范操作,减少因技术层面导致的假阴性、假阳性,提高检测灵敏度和特异性,中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织制定了《流式细胞术检测脑脊液肿瘤细胞的专家共识》(简称《共识》)

脑脊液检测肿瘤细胞到底有多重要呢?

王卉主任举了一个例子,十年前一个夜晚,北京一家大三甲医院焦急的患者父亲送来一份脑脊液标本。患儿是发热和颈项僵直的状态,临床医生首先考虑的是脑膜炎,王卉主任亲自进行检测,正常脑脊液中细胞较少,T 淋巴细胞为主,以及少量单核细胞,其他细胞很难见到。

该标本中发现了一群 CD45 阴性 CD56 阳性细胞。首先考虑非造血系统肿瘤细胞可能性大,后来连夜做了更多的标志证实为神经母细胞瘤。及时反馈给临床医师,尽快进一步完善检查,最后证实该诊断,患儿获得及时正确的治疗,至今状态良好。

该病例脑脊液细胞数量增多不明显,因此其他检测结果不能提供帮助,流式成为第一个做出正确诊断提示的技术。

虽然流式细胞术检测脑脊液非常重要,但是检测的困难程度限制了该项目的广泛临床应用。因此专家们就适用范围、检测方案、操作中注意事项、发出合理的报告等几个方面详尽提出推荐方法和推荐强度。

共识指出

急性白血病、淋巴瘤、转移癌等多种淋巴造血和非造血肿瘤都有可能累及中枢神经系统,因此急性白血病、有症状的其他肿瘤应尽可能进行脑脊液的流式细胞术检测。

由于脑脊液无法大量取材,细胞数量少,细胞存活时间短等特点,给该技术检测带来挑战,因此操作和分析过程很重要。

脑脊液标本流式细胞术检测的要点

采集后尽快低温送检。最好不要超过 4-8 小时送到,实验室接到标本后尽快处理。

处理过程中注意回收每一个细胞,尤其是标记、离心、洗涤的过程中,尽量使用尖底 EP 管或者试管,用吸管或者移液器去上清。

注意保持流式细胞仪的管道清洁。注意体现为日常仪器保养,以及上样前注意冲洗进样针和管道,避免管间污染。

方案设计中,注意覆盖常见疾病重要诊断相关标志,并且因为胞浆染色处理过程复杂,容易丢失细胞,所以尽量使用胞膜抗体替代胞浆抗体,除非细胞量大,或者不可替代的情况下,才会使用胞浆抗体。

获取前,使用血液标本调整好仪器条件,避免用珍贵的脑脊液标本调整仪器条件。

获取过程中,注意尽可能收集所有脑脊液细胞。但是也要避免获空。

分析过程中,注意正确识别非特异性染色、死细胞与真正的细胞。

报告的时候,因为脑脊液标本细胞数量少,而流式细胞术对于细胞检测真实性有效性的判断,一般是要求最少 20-25 个有效细胞(特殊情况下,有人提出 10 个细胞聚集、背景干净,可以判断有效),因此除了报告肿瘤细胞的比例,还要求给出细胞数,就是为了准确判断肿瘤负荷和报告的可靠性。

比如同样 20% 肿瘤细胞,一个报告是 8 个细胞,一个报告是 2000 个细胞,前者结果可信度不高,后者是有效报告。

鉴于临床实际工作当中,大家所用机型不一致,如四色流式、八色流式、十色流式,甚至 20 多色的全光谱流式。虽然目前主流机型是 3 激光 8-10 色,但是为了让共识更具有适用性、可行性、普及性,笔者提供了不同方案供大家选择。对于这种方案推荐,共识中尊重每一个单位,采取建议参考的方式。

共识建议

共识中建议大家随报告提供彩色图片,因为肿瘤是一个重大疾病,治疗过程漫长,患者经常会转院和会诊,并根据初治免疫分型进行随访,所以经常会需要报告供同行参考。彩色图片是提供给同行参考的重要图像依据。

总之,流式细胞术检测脑脊液肿瘤细胞非常重要,为了更好地让每个有条件的实验室做好流式细胞术检测脑脊液标本,王卉主任和刘贵建主任代表中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织众多行业内著名专家完成了这个共识。希望给临床医师提供快速、准确的报告,从而让患者尽早获得精确诊断和适当治疗。

作者简介

河北燕达陆道培医院王卉主任:流式细胞术检测脑脊液肿瘤细胞的专家共识解读

王卉主任,陆道培医疗集团(河北燕达陆道培医院、北京陆道培医院、北京陆道培血液病医院)检验科副主任(副院长级)、流式细胞室主任,信纳克(北京)生化标志物检测医学研究有限责任公司主任、CEO、CMO。

从事流式细胞术检测 20 年。取得 4 项国家发明专利,2 项实用新型专利,3 项作品登记。累计在全国和各省市学术会议上讲座 700 余场,足迹遍布全国 28 个省、自治区、直辖市(包括台湾);累计接收进修医 200 名,来自全国 26 个省、自治区、直辖市(包括台湾)。独立签发 40 万临床报告,每个月标本中 40% 是来自全国各地的疑难会诊病例。

中国中西医结合学会检验医学专业委员会流式细胞分析诊断专家委员会主任委员;北京医学检验学会血液和体液检验分会副会长;中国非公立医疗机构协会血液委员会常委;中国临床流式联盟常委;中国抗癌协会淋巴瘤学组委员;中国血液免疫学会流式学组委员;中国生物工程学会细胞分析专委会委员等。

 

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